1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中甲氧芐啶殘留量的制樣和高效液相色譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚(包括鰻鱺)、蝦、蟹和龜鱉可食組織中甲氧芐啶殘留量的檢測。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的（興）版本。凡是不注日期的引用文件，其（興）版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 1.1-2000標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則

GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

SC/T 3016水產(chǎn)品抽樣方法

3 原理

試料中殘留的甲氧芐啶，用三氯甲烷和酸性甲醇溶液提取，二氯甲烷反萃取，MCX固相萃取柱凈化，高效液相色譜-紫外測定，外標(biāo)法定量。

4 試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑；水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥98%。

4.2 三氯甲烷：色譜純。

4.3 甲醇：色譜純。

4.4 高氯酸：優(yōu)級(jí)純。

4.5 硫酸：優(yōu)級(jí)純。

4.6 二氯甲烷：色譜純。

4.7 *：優(yōu)級(jí)純。

4.8 乙酸：優(yōu)級(jí)純。

4.9 氨水

4.10 MCX陽離子固相萃取柱：60mg/3mL,或相當(dāng)者。

4.11 0.5%高氯酸溶液：取高氯酸5mL,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.12 0.1moL/L硫酸溶液：取硫酸5.4mL,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.13 2moI/L氫氧化鉀：取氫氧化鉀112.2g,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.14 5%乙酸溶液：取乙酸50mL,用水溶解并稀釋至1000mL。

4.15 5%氨水甲醇溶液：取氨水5ml,用甲醇溶解并稀釋100mL。

4.16 100ug/mL甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)品10mg,于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為100ug/mL的甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)貯備液。-4℃以下避光保存，有效期3個(gè)月。

4.17 10ug/mL甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0mL,于10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為10ug/mL的甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)工作液。-4℃以下避光保存，有效期3個(gè)月。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀：配紫外檢測器。

5.2 分析天平：感量0.00001g。

5.3 天平：感量0.01g。

5.4 均質(zhì)機(jī)

5.5 旋渦混合器

5.6 離心機(jī)

5.7 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器

5.8 固相萃取裝置

5.9 茄形瓶

5.10 具塞離心管：50mL。

5.11 分液漏斗：150mL。

5.12 濾膜：0.45um。

6 試料的制備與保存

6.1 試料的制備

取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。

—取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。

—取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。

—取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試料。

6.2試料的保存

-18℃以下保存。

7 測定步驟

7.1 提取

稱取試料(5±0.05)g,于50mL具塞離心管中，加三氯甲烷15mL、甲醇14mL、0.1mol/L硫酸溶液6mL,旋渦混合2min,4000r/min離心3min,取上清液于150mL分液漏斗中。殘?jiān)屑蛹状?4mL和0.1mol/L硫酸溶液6mL,重復(fù)提取一次，合并兩次上清液于分液漏斗中，加2mol/L氫氧化鉀溶液2mL、二氯甲烷30mL,振搖2min,靜置分層，取下層液于茄形瓶中，分液漏斗中加二氯甲烷30mL重復(fù)提取一次，合并兩次下層液，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用5%乙酸溶液6mL溶解殘余物，備用。

7.2 凈化

MCX陽離子交換柱依次用甲醇6mL和5%乙酸溶液6mL活化，取備用液過柱，用5%乙酸溶液6mL和甲醇6mL淋洗，用氨水甲醇溶液15mL洗脫，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用流動(dòng)相1.0mL溶解殘余物,濾膜過濾，供高效液相色譜測定。

7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取甲氧芐啶標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，用流動(dòng)相稀釋，配制成濃度為50、200、500、1000、2000、5000ug/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

7.4 測定

7.4.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX-C₁₈柱(250mm×4.6mm,粒徑5um),或相當(dāng)者。

流動(dòng)相：甲醇+0.5%高氯酸溶液(3(0+70,v/v)；

流速：1.0mL/min；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣量：20uL；

檢測波長：230nm。

7.4.2 測定法

取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中甲氧芐啶響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。

7.5 空白試驗(yàn)

除不加試料外，采用*相同的步驟進(jìn)行平行操作。

8 結(jié)果計(jì)算

試料中甲氧芐啶的殘留量(ug/kg):按下式計(jì)算

式中：

X—試試料中甲氧芐啶的殘留量，ug/kg;

C—試樣溶液中甲氧芐啶的濃度，μg/mL;

V—溶解殘余物體積，mL；

m—供試試料質(zhì)量，g。

注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

9 方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精卻度

9.1 靈敏度

本方法的定量限為20ug/kg。

9.2 準(zhǔn)確度

本方法在20～1000ug/kg添加濃度水平上的回收率為70%～110%。

9.3 方法精密度

本方法批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤15%,批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤15%。